怎样算某蛋白的在重组菌中的表达量?

做蛋白纯化,想算纯化的回收率的···纯化后的蛋白浓度可以算,但是纯化前的怎么算啊?这细菌表达那么一大堆,我怎么算我的目的蛋白的表达量啊?

求解求解,急用急用,狂谢狂谢···

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2个答案
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冷月如霜植物细胞生物学博士生

2013-05-09 12:43

做个IPTG诱导前后的对比,跑SDS PAGE胶。用同等OD同等体积的菌液收集细胞裂解做样品,染色后看条带浓度,然后做一系列浓度梯度。旁边跑一个已知浓度的蛋白,比如BSA。这样可以确定在哪一个数量级。或者可以再跑一块胶,不染色,把对应位置的给切下来,液氮冻完磨碎重新溶解,去测浓度。

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哺乳动物瞬时蛋白表达或原核蛋白表达可以通过SDS PAGE判断蛋白表达量,具体的得通过浓度验证吧

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