定点突变是怎样实现的?

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哥白尼胶布生物化学与分子生物学再读博士

2013-11-14 16:33

怎么还会有人@我啊,我也不认识呢。第一次有人@我 ,那我就简单说一下。

对于平常试验中的定点突变,一般是针对某个载体中的序列进行突变,一般使用的步骤是使用包含突变位点两侧序列的引物,并且引物是要互补的,然后就是进行高保真的PCR,这样在生成的片段中,产物都是包含有点突变引物的。然后把原始的序列消化掉(一般原始质粒都会有甲基化,使用甲基化敏感的内切酶切一下就好,如果原始质粒么有甲基化,那就直接进行下一步),将新生成的序列进行转化大肠杆菌,收获质粒就得到了突变过之后的了(如果之前是全转化的话,那就再鉴定一下,找到突变过来的,就好了)。。不晓得你听明白了吗?

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